產(chǎn)品描述

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種常用的細胞核熒光染料，是溴化乙錠（EB）的類似物，能夠嵌入DNA的堿基對間而結(jié)合，無顯著的序列偏好，大約每4-5個堿基對結(jié)合一個染料分子。PI也可與RNA結(jié)合，為區(qū)分DNA與RNA染色，通常需添加核酸酶處理。PI水溶液的激發(fā)/發(fā)射波長為493/636 nm，但與核酸結(jié)合后，熒光信號增強20-30倍，且激發(fā)/發(fā)射波長變?yōu)?35/617nm。PI適用于熒光顯微鏡，共聚焦顯微鏡，流式細胞儀以及熒光計分析。

PI不能穿透細胞膜而被排斥在活細胞外，但是可以穿過破損的細胞膜而對核染色。利用這一特性，通常與Calcein-AM、Hoechst 33258 (貨號：AC12L012) 或 Hoechst 33342 (貨號：AC12L022)等活細胞熒光探針一起使用，同時對活細胞和死細胞染色和鑒定，用于細胞凋亡相關(guān)的研究。同時，PI用作多重?zé)晒馊旧膹?fù)染劑，兼容于各種細胞標(biāo)記技術(shù)，包括直接或者間接的熒光抗體檢測，mRNA原位雜交，細胞結(jié)構(gòu)特異性的熒光探針檢測法以及組織染色。PI染色也適用于細胞周期分析。

本產(chǎn)品為水溶液形式的PI儲存液，濃度為1 mg/ml，稀釋至適當(dāng)工作濃度即可使用。

訂購信息

運輸與保存

藍冰運輸。-20℃避光保存，有效期 6個月。

使用方法

1.     貼壁細胞復(fù)染步驟（熒光顯微鏡檢測）

1.1  樣本準(zhǔn)備：根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細胞。PI染色一般在其它染色完成后再進行。PI復(fù)染要求細胞經(jīng)透化處理。

1.2  RNase酶處理：若樣本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，則需要進行RNase處理。若樣本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。

1.2.1      在2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；

1.2.2      將本品置于含有100µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20min；

1.2.3      用2×SSC溶液清洗樣本3次，每次1min。

1.3  復(fù)染

1.3.1      2× SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；

1.3.2      直接用2×SSC稀釋1mg/ml（1.5 mM）PI儲存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300µl染液足夠用于一個蓋玻片細胞制片，染色1-5min。

1.3.3      2×SSC清洗幾次，流盡多余的緩沖液后，加入抗淬滅劑封片。

1.3.4      選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。

2.     懸浮細胞復(fù)染步驟（流式細胞儀檢測）

2.1  樣本準(zhǔn)備：根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細胞。或者使用如下的步驟：

收集一定量的細胞，密度約 2×105 ~1×106。離心收集細胞，吸掉上清液，用手輕彈管壁就剩下的液體重懸細胞。之后加入1ml常溫存放的PBS；將所有的重懸細胞轉(zhuǎn)移到4ml于-20oC預(yù)冷的無水乙醇，在高速渦旋混勻的同時一邊用槍緩慢的添加細胞懸液到乙醇內(nèi)。于-20oC乙醇中固定5-15min。離心收集細胞，除去乙醇。用手輕彈管壁以彈松細胞后，加入5ml室溫的PBS。允許細胞水化15min；

2.2  復(fù)染

用染色液（100mM Tris, pH 7.4, 150mM NaCl, 1mM CaCl2 , 0.5mM MgCl2 , 0.1% NP-40）稀釋1mg/ml（1.5 mM）PI儲存液 1:500，得到3µM的PI工作液。1ml的PI染色液足夠用于每個細胞樣本的檢測。

注：工作液的使用濃度可以根據(jù)自身實驗體系調(diào)整，也可以直接使用PBS，HBSS等緩沖液直接稀釋PI儲存液到需要的濃度。樣本制備的步后離心收集細胞，去除上清，用手輕彈管壁以彈松細胞后，加入1ml的PI染色工作液。室溫孵育15min后，流式細胞儀進行細胞分析。若用流式顯微鏡觀察，則需要離心樣本，去除上清并重懸細胞在新鮮的緩沖液中。吸取1滴懸液到載玻片上，蓋上蓋玻片后觀察。

3.     染色質(zhì)FISH復(fù)染步驟

3.1  樣本準(zhǔn)備：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)步驟制備樣本。復(fù)染之前的步用去離子水清洗樣本以去除玻片上殘留的緩沖鹽。室溫晾干。此步驟有助于減少非特異性的背景染色。

3.2  復(fù)染

工作液的配制：用PBS緩沖液直接稀釋1mg/ml（1.5mM）的PI儲存液1:1000，得到1.5µM的PI染色工作液。滴加300µL的工作液直接到樣本。有必要的話，工作液內(nèi)加入新鮮制備的RNase A（終濃度：10 mg/mL）。可使用塑料蓋玻片均勻分布染液在載玻片上。室溫避光條件下孵育樣本30 min；如果加入RNase則37oC孵育。去除蓋玻片，用PBS或去離子水清洗以除去沒有結(jié)合的染料；用吸水紙巾圍繞著樣本周圍吸取殘留液體，蓋上玻璃蓋玻片后用石蠟或者指甲油封住蓋玻片邊緣。也可用抗熒光淬滅劑進行封片。選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。

注意事項

1． 本產(chǎn)品于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2． 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3． 碘化丙啶（PI）是已知的誘變劑，因此PI溶液在丟棄之前需要先經(jīng)過活性炭處理。

4． 次使用本試劑盒時建議先取1-2個樣品做預(yù)實驗。

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本產(chǎn)品于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。