產(chǎn)品描述
　　SDS細(xì)胞裂解液（帶抑制劑）是一種比較強(qiáng)烈的細(xì)胞組織裂解液，通過陰離子去垢劑SDS促進(jìn)細(xì)胞膜的崩解，特別適用于膜蛋白或者細(xì)胞骨架蛋白等難溶蛋白的溶解，有利于膜蛋白，胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取。本產(chǎn)品具有有強(qiáng)烈的蛋白變性作用，不能用于非變性蛋白方面的研究。本產(chǎn)品裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀 (chromatin immunoprecipitation，ChIP)等。
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產(chǎn)品組分

保存方法
　　裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保質(zhì)期一年。
使用方法
1. 對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品

對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1~2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10 min。
對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50~100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘。具體SDS細(xì)胞裂解液的使用量參照表1.
(3) 充分裂解后，10000~14000rpm離心3~5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和ChIP等操作。
2. 對(duì)于組織樣品：
(1) 把組織*切成細(xì)小的碎片。
(2) 融解SDS細(xì)胞裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。
(3) 按照每20毫克組織加入150—250μL裂解液的比例加入裂解液，如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。具體SDS細(xì)胞裂解液的用量參照表1。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘。
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和ChIP等操作。
注意事項(xiàng)

表1 :SDS細(xì)胞裂解液的使用量

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